Как оргонизовать лабораторию для клонального размножения

Для клонального микроразмножения растений, в том числе и смородины, необходима организация специальной лаборатории, в которой готовят растительный материал для асептической кулътуры и питательные среды, стерилизуют последние и вспомогательные средства, а также осуществляют операции с изолированными органами.

Такая лаборатория должна иметь в своем составе четыре основных помещения.
1. Комната для мойки посуды, совмещенная с автоклавной.
2. Помещение для приготовления питательных сред и хранения лабораторной посуды и химических реактивов.
3. Изолированное помещение для операций в стерильных условиях (Операционная).
4. Помещение для инкубации культур в контролируемых условиях.

Каждое из помещений должно соответствовать определенным требованиям для обеспечения удобства в работе и обеспечения техники безопасности.

Моечная и автоклавная. Помещение должно отвечать требованиям, предъявляемым к помещениям для установки сосудов, работающих под давлением. Необходимо предусмотреть подводку холодной и горячей воды, установку глубоких моек для мытья посуды, подводку силовой линии 220/380 в и контур заземления.

В этой комнате устанавливают следующие приборы и оборудование: дистиллятор Д25 ил.и аналогичного типа; автоклав вертикальный ВК60, ВК75; автоклав горизонтальный ГК1001 (ГК1002); сушильные пгкафы (любого типа).

Комната для приготовления питательных сред. Ее снабжают подводкой холодной и горячей воды, подводкой силовой линии (220/380 в), контуром ааземления, мойками. Из оборудования и приборов в ней должны находиться: электроплитки — 3—5 шт. (любого типа); магнитные мешалки — 2 шт.; шкафы остекленные для лабораторной посуды; весы аналитические типа ВЛА200;
весы ВЛТК500 — 2 шт.; весы торсионные—1 шт.; рНметр лабораторный (любого типа); бидистиллятор (любого типа с производительностью не ниже 3 л/ч); шкафы для хранения химических реактивов; посуда химическая мерная (от 5 мл до 2 л) (колбы, стаканы, цилиндры); пипетки и микропипетки от 0,01 до 50 мл; пинцеты, скальпели, ножницы, шпатели разные; лробирки химические ПХ 0 14 мм; лробирки биологические ПБ 0 21 мм; колбы конические (Эрленмейера) на 100 мл.

Операционная. При организации этого помещения необходимо оборудовать компенсационный тамбур, в котором устанавливают раковину с подводкой воды, а также стол для стерилизации растительного материала. Кроме того, в тамбуре устанавливают бактерицидные лампы типа БУВ30 из расчета одна лампа на 1,5—2 м2 с автономным выключателем. Рабочая зона операционной должна иметь подводку силовой линии электроснабжения, а также контур заземления.

В рабочем объеме помещения устанавливают: камеры пылезащитные (ламина!рбоксы) типа КП5, КПГl или другие аналогичного типа — 5—7 шт.; облучатель ультрафиолетовый медицинский типа ОПБа450 или аналогичный — 1 шт.; лампы кварцевые типа БУВ30 — 4 шт.; микроскопы стереоскопические МБС2, МБС9 — 5 шт.

Для стерилизации комнаты в ночное время медицинский ультрафиолетовый облучатель и кварцевые лампы подключают через магнитный пускатель 1=2 величины к программному реле времени типа 2РВМ. Это позволяет приступить к работе в операционной с начала рабочего дня, так как после отключения бактерицидных ламп должно пройти 1—2 ч.

Помещение для инкубации культур. Это помещение также должно иметь подводку силовой линии и контур заземления. В помещении устанавливают светоэтажерки типа СЭ81 конструкции ПКБ НИЗИСНП или их модификации. Для поддержания заданной температуры используют включаемые с помощью контактного термометра бытовые кондиционеры типа БК2500 (4—8 шт., в зависимости от объема помещения и числа светоэтажерок), а также вытяжной вентилятор производительностью не менее 30 м3/мин.

Химические реактивы для приготовления питательных сред. Клональное микроразмножение смородины ведут главным образом на модификациях сред, составленных по известной прописи МурасигеСкуга (1962), для
приготовления которых необходимы следующие химические реактивы (в,кг):
аммоний азотнокислый (NH4NO3) . 3
калий азотнокислый (КЛОз) . 3
кальций хлористыл (СаС]22Н2О) 2
магний сернокислый (MgSO47H2O) . 3
калий фосфорнокислый однозамещеиный (КН2РО4) 3
борная кислота (Н3ВО3) 0,5
кобальт хлористый (СоС126Н20) 0,5
медь сернокислая (CuSOv5H2O) 0,5
марганец сернокислый (MnSO44iH2O) . 0,5
калий йодистый (KJ) 0,5
натрий ыолвбденовокнелый (NaaMoOHsO) 0 5
цинк сернокислый (ZnSO47H2O) 0,5
железо сернокислое (FeSO47H2O) . 0,5
трилон Б (Na2 ЭДТА2Н2О) 1,0
сахароза (СцНвОи) 15,0
вндолнлмасляная кислота (C]2H13O2N) . 0,1
6бензиламинопурин (C12HuNs) 0,05
гибберелловая кислота (С;9Н22О6) 0,1
аскорбиновая кислота (С6НЕОе) 0,1
инозит (C6Hi20e) 1,0
никотиновая кислота (CeHsNCb) 0,05
пиридоксин солянокислый (CsHnNOsHCI) 0,05
тиамин солянокислый (Ci2Hi7C1N4SOHC1) 0,05
гндролизат казеина 2
агарагар. 5

Кроме того, для работы в операционной нужен этиловый спирт из расчета 3—5 л/мес. на каждого работающего. Для стерилизации растительного материала используют ртутные препараты (сулема) или диацид, для приготовления маточных растворов 6бензиламинопурина и доведения рН среды до .необходимых значений — ОД N растворы ЫаОНи НС1.